产品货号：
BTN15-73500
中文名称：
节菱孢霉属荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Arthrinium spp. qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测节菱孢霉属通用的试剂盒。
节菱孢霉菌(Arthrinium spp.)简称节菱孢或节菱孢菌，是一类产毒霉菌，有20多个种，其中使甘蔗变质并产生有神经毒素的节菱孢霉菌主要是甘蔗节菱孢菌(Arthrinium sachari)、暗孢节菱孢菌(Arthrinium phaeospermum)和蔗生节菱孢菌(Arthrinium saccharicola)。其产生的毒素为3-硝基丙酸，是一种耐热性水溶性有毒物质，主要损害中枢神经系统。从某种意义上讲，有甘蔗存在，就有节菱孢菌威胁人体健康的潜在危险存在，因此快速检测节菱孢霉属具有重要意义。
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化，灵敏性高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据节菱孢霉属通用高度保守区设计。
5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7.本产品只能用于科研。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
如果做定性实验，则此步可以跳过。如果做定量实验，则需要稀释阳性对照做标准曲线。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。本产品只提供DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：节菱孢霉属荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Arthrinium spp. qPCR Kit(Probe Method)
节菱孢霉菌(Arthrinium spp.)简称节菱孢或节菱孢菌，是一类产毒霉菌，有20多个种，其中使甘蔗变质并产生有神经毒素的节菱孢霉菌主要是甘蔗节菱孢菌(Arthrinium sachari)、暗孢节菱孢菌(Arthrinium phaeospermum)和蔗生节菱孢菌(Arthrinium saccharicola)。其产生的毒素为3-硝基丙酸，是一种耐热性水溶性有毒物质，主要损害中枢神经系统。从某种意义上讲，有甘蔗存在，就有节菱孢菌威胁人体健康的潜在危险存在，因此快速检测节菱孢霉属具有重要意义。
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化，灵敏性高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据节菱孢霉属通用高度保守区设计。
5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7.本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 节菱孢霉属通用探针法qPCR引物-探针混合液 | 50μL |
| 节菱孢霉属通用探针法qPCR阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
如果做定性实验，则此步可以跳过。如果做定量实验，则需要稀释阳性对照做标准曲线。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。本产品只提供DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液(最好用带芯枪头，下同)。
- 在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在4号管中加入5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是样品制备PC(样品制备阳性对照)，一个是样品制备NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为样品制备PC。另外用水作为样品制备NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号管中的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为描述操作步骤，
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管标准曲线样品管
(1～6管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 节菱孢霉属通用探针法qPCR引物混合液-探针混合液 3μL 3μL 各3μL N+2个待测DNA模板 7μL - - 超纯水 - 7μL - 第6步所得标准曲线样品稀释液(1～6号) - - 各7μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5min qPCR反应
(40个循环)95℃ 15sec 60℃ 1min(采集FAM通道的荧光信号)
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于35。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
相关搜索：节菱孢霉属荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Arthrinium spp. qPCR Kit(Probe Method)